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如何控制微生物實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量?

更新時(shí)間:2015-09-08點(diǎn)擊次數(shù):2287

一、質(zhì)量控制相關(guān)定義

質(zhì)量控制:滿足質(zhì)量要求的操作技術(shù)和活動(dòng)。

質(zhì)量保證:為了滿足實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量要求 ,制定相應(yīng)的計(jì)劃,實(shí)施證明(記錄)所進(jìn)行的一系列的系統(tǒng)活動(dòng)

外部質(zhì)量控制:通過(guò)互相校準(zhǔn)和/或檢驗(yàn)對(duì)實(shí)驗(yàn)室的操作和結(jié)果所進(jìn)行的控制

內(nèi)部質(zhì)量控制:實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部采取的以對(duì)比分析、跟蹤以及相關(guān)方法,對(duì)實(shí)驗(yàn)室工作的連續(xù)性控制計(jì)劃。

質(zhì)量手冊(cè):是描述質(zhì)量系統(tǒng)元素的文件或文件的集合。

二、實(shí)驗(yàn)室要求
按國(guó)家實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可的概念,是指一個(gè)能夠承擔(dān)法律責(zé)任的實(shí)體。這里所指的是實(shí)驗(yàn)室(微檢室)內(nèi)建立的質(zhì)量管理的保證體系。人員、房屋 設(shè)備滿足檢測(cè)工作需要。

1、人員要求
實(shí)驗(yàn)室人員的分類:管理人員、技術(shù)人員、人員等。
相應(yīng)崗位的人員,應(yīng)具備相應(yīng)的技術(shù)能力,相應(yīng)的技術(shù)能力證明(證書及證件)。
微生物檢驗(yàn)室因有相應(yīng)技術(shù)能力的人負(fù)責(zé)室內(nèi)的技術(shù)工作。并設(shè)立質(zhì)量監(jiān)督員。

2、房屋條件要求
房屋要求:具有適宜、足夠?qū)挸?、通風(fēng)有良好的照明。
房屋內(nèi)墻面及地等應(yīng)采用易于清潔的材料,保持房間清潔。
房間的設(shè)置,以其開(kāi)展的工作內(nèi)容加以分用,設(shè)立房間。
房間的大小還應(yīng)根據(jù)從事實(shí)驗(yàn)人員的進(jìn)入數(shù)量上加以考慮。

3、環(huán)境設(shè)施要求
房間的溫濕度控制與記錄(樣品存放室)
特殊環(huán)境的微生物指標(biāo)控制與記錄(無(wú)菌室等)
工作室的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程和定期的檢測(cè)校準(zhǔn)程序。(潔凈室等)
特殊環(huán)境中的設(shè)施質(zhì)量控制應(yīng)符合有關(guān)要求(凈化工作臺(tái))

三、設(shè)備控制和程序
微生物檢驗(yàn)常用需監(jiān)控的設(shè)備和儀器:
1培養(yǎng)箱(生化培養(yǎng)箱或CO2培養(yǎng)箱等)、干燥箱、高壓滅菌鍋、凈化工作臺(tái)、pH計(jì)、 冰箱,(低溫冰箱或冷柜)溫度計(jì)、紫外燈、顯微鏡、離心機(jī)、天平、。
2小計(jì)量容器
3微生物測(cè)定儀器、微生物檢定儀器、空氣采樣器、酶標(biāo)儀等。

1、高壓滅菌鍋的溫度控制
高壓滅菌鍋;生物指示菌法(常用)、化學(xué)變色紙片及高壓滅菌鍋溫度計(jì)等方法進(jìn)行檢測(cè)。
生物指示菌法是一種高壓滅菌鍋的效果顯示法。
高壓滅菌鍋由專人按作業(yè)指導(dǎo)書操作,并做好每一次的作業(yè)記錄。
高壓滅菌鍋使用時(shí),內(nèi)置物品不能太多,單位體積內(nèi)的內(nèi)容物(每瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基)不能太多。同時(shí)應(yīng)注意內(nèi)容物不同耐受溫度??偟谋┞稌r(shí)間不要超過(guò)45min。
高壓滅菌鍋日常工作記錄應(yīng)包含以下信息:高壓滅菌的材料、開(kāi)始時(shí)間、壓力/溫度、取出時(shí)間、高壓滅菌膠帶的顏色變化(日常常用無(wú)菌培養(yǎng)代替)
高壓滅菌鍋溫度波動(dòng)范圍:110,115和121±2℃。
高壓滅菌鍋校準(zhǔn)周期一般在半年。

2、干燥滅菌箱溫度控制
干燥滅菌箱日常工作記錄中應(yīng)包括以下信息:開(kāi)始的時(shí)間、到達(dá)滅菌溫度時(shí)的時(shí)間、取出的時(shí)間(或關(guān)閉時(shí)間)。
干燥滅菌箱的溫度校準(zhǔn);用參考溫度計(jì)進(jìn)行溫度測(cè)試。
干燥滅菌箱溫度要求與度:160±5 ℃或180 ±5 ℃。前者為滅菌2h,后者為30min。
干燥滅菌箱校準(zhǔn)時(shí)間一般為一年。

3、培養(yǎng)基配制用蒸餾水的控制
對(duì)于蒸餾水器來(lái)說(shuō):按設(shè)備說(shuō)明,定期清潔離子交換器和更換離子交換材料。
檢測(cè)要求:西歐標(biāo)準(zhǔn)為微生物檢驗(yàn)用蒸餾水的特定電導(dǎo)率<0.5ms/m;細(xì)菌數(shù)<50cfu/ml。我們?nèi)粘S玫臉?biāo)準(zhǔn)為 <10ms/m,未見(jiàn)有細(xì)菌指標(biāo)。
檢測(cè)頻率:1次/每月。
蒸餾水定點(diǎn)供應(yīng),并做好相應(yīng)的質(zhì)量控制,記錄檢測(cè)結(jié)果。

4、天平的管理
天平放置要求:無(wú)振動(dòng)、無(wú)氣流影響及水平臺(tái)面上。
天平要有使用及運(yùn)行檢查記錄。
天平作為計(jì)量?jī)x器是列入國(guó)家強(qiáng)制檢定的范圍,一般1次/年進(jìn)行檢定。
運(yùn)行檢查頻率按運(yùn)行計(jì)劃或按產(chǎn)品(天平生產(chǎn)廠家)給出的標(biāo)準(zhǔn)重量單位進(jìn)行對(duì)照

5、pH計(jì)
pH計(jì)使用前應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)液進(jìn)行校準(zhǔn)。
緩沖液使用有效期:PH4.00 約1年
PH7.00 約6個(gè)月
pH9.00 約6個(gè)月
pH計(jì)的維護(hù):電極外表的定期清洗;電極敏感性檢測(cè)及極性恢復(fù)。

6、凈化工作臺(tái)的控制
水平流凈化工作臺(tái)工作區(qū)域,要求潔凈度為100級(jí)??諝獬两?0min,細(xì)菌數(shù)<1個(gè)/皿。垂直流凈化工作臺(tái),細(xì)菌數(shù)<0.49個(gè)/皿.
凈化工作臺(tái)運(yùn)行檢查頻次:1次/月主要是細(xì)菌沉降檢測(cè)。
凈化工作臺(tái)過(guò)濾膜一般為一年更換一次,并同時(shí)進(jìn)行粒子與細(xì)菌沉降檢測(cè)。

7、紫外線燈的控制
檢測(cè)方法:儀器測(cè)試法和生物測(cè)試法。前者是通過(guò)儀器檢測(cè)紫外燈管發(fā)射的紫外光強(qiáng)度。國(guó)家消毒技術(shù)規(guī)范中表明在距離照射無(wú)1米處,要求其強(qiáng)度為90。
生物測(cè)試法:采用一定的菌培養(yǎng)物,經(jīng)一定比例稀釋,菌量控制在200-250個(gè)/0.5ml,涂布平板在紫外燈光下照射,2min,同時(shí)設(shè)置普通光源的對(duì)照組,后置37℃48h,計(jì)算其殺滅率。要求殺滅率達(dá)99%。

8、顯微鏡的控制

顯微鏡應(yīng)制定作業(yè)指導(dǎo)書,日常維護(hù)記錄及自校記錄。
顯微鏡應(yīng)置于無(wú)振動(dòng),避免灰塵,防潮等要求的環(huán)境。

9、其它微生物檢測(cè)儀器的控制
細(xì)菌鑒定儀、酶標(biāo)儀等設(shè)備,工作中常用陽(yáng)性對(duì)照檢測(cè)其功能正常性。
儀器的檢定則按有關(guān)的部門檢定或按自校作業(yè)指導(dǎo)書進(jìn)行。
儀器的使用登記、校準(zhǔn)計(jì)劃、校準(zhǔn)記錄等文件存檔。
儀器專人使用、操作者應(yīng)取得相應(yīng)的崗位培訓(xùn)合格,持證上崗。

四、培養(yǎng)基質(zhì)量控制

正確進(jìn)行培養(yǎng)基質(zhì)量控制,并作為一項(xiàng)經(jīng)常性的工作,建立完整的檢驗(yàn)資料,是實(shí)驗(yàn)室今后通過(guò)相應(yīng)級(jí)別的認(rèn)證,在整個(gè)檢驗(yàn)質(zhì)量控制體系中所必須具備的文件資料。
現(xiàn)有的依據(jù):衛(wèi)生部1993年發(fā)布的食品檢驗(yàn)用干燥培養(yǎng)基生產(chǎn)質(zhì)量控制。但這個(gè)標(biāo)準(zhǔn)不完善。

1、常用培養(yǎng)基的質(zhì)量控制
檢驗(yàn)項(xiàng)目與方法:對(duì)新批號(hào)的干燥培養(yǎng)基物理、化學(xué)及生物學(xué)指標(biāo)鑒定
A:感官(外觀)研細(xì)程度和顏色(溶解前后),透明度,雜質(zhì)等;
B:PH測(cè)定,按各種培養(yǎng)基要求的PH±0.2,蒸餾水的PH應(yīng)在6.4-7.0之間。
C:生物學(xué)指標(biāo)檢定,被檢培養(yǎng)基相應(yīng)細(xì)菌生長(zhǎng)率測(cè)試;菌落大小及特征的檢測(cè)。
生長(zhǎng)率測(cè)試:適用與液體和固體培養(yǎng)基:將菌培養(yǎng)液,用生理鹽水做倍比稀釋,取合適稀釋度進(jìn)行平板計(jì)數(shù)或接種被檢的培養(yǎng)基試管,同時(shí)以按相關(guān)的培養(yǎng)基國(guó)標(biāo)配方新鮮配制的培養(yǎng)基進(jìn)行對(duì)照。不低與10%。
菌落大小測(cè)試:劃線分離測(cè)試菌,取10個(gè)菌落測(cè)量直徑大小,其直徑均值與新鮮配制的培養(yǎng)基無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

2、常用培養(yǎng)基質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)
外觀和理化標(biāo)準(zhǔn):
干粉顏色:淡黃色粉末或呈現(xiàn)本培養(yǎng)基*的顏色
溶解后培養(yǎng)基色澤:清晰透明(含瓊脂除外)淡黃色或*的色澤;
滅菌后的培養(yǎng)基PH:7.2±2℃為多;個(gè)別弧菌檢驗(yàn)用培養(yǎng)基pH值偏高為:8.0 ±2℃
生物學(xué)指標(biāo):菌落特征及菌落大小 。

3、培養(yǎng)基保存環(huán)境
制成的培養(yǎng)基保存環(huán)境為4℃冰箱,如制成平板則用塑料袋包裝置冰箱保存,
干燥培養(yǎng)基干粉含有活性物質(zhì)、遇熱易分解的物質(zhì)應(yīng)仔細(xì)查看存放條件,多數(shù)也須放在2-8 ℃條件保存。
有的培養(yǎng)基則以存放于10-15 ℃條件為易。如含有高濃度膽鹽的培養(yǎng)基。

4、培養(yǎng)基制備控制程序
培養(yǎng)基配制所用的儀器設(shè)備培養(yǎng)基配制所用的儀器設(shè)備必須經(jīng)過(guò)相應(yīng)的鑒定 。
配制培養(yǎng)基所用的用具及容器配制培養(yǎng)基所用的用具及容器必須是清潔或是滅菌的,一些特殊不易洗刷清潔的玻璃器皿,必要時(shí)可用重鉻酸鉀硫酸清潔浸泡后,取出置5%氫氧化鈉溶液浸泡數(shù)分鐘,再用3%鹽酸溶液進(jìn)行中和,然后用清水沖洗,烘干后備用。

5、培養(yǎng)基配制原料,試劑質(zhì)量控制
配制好的培養(yǎng)基(尤其是糖發(fā)酵管)不宜久放。,因?yàn)榕囵B(yǎng)培養(yǎng)基吸收空氣中的二氧化碳,會(huì)使培養(yǎng)基變酸,從而影響細(xì)菌的生長(zhǎng)。
培養(yǎng)基中的抑制劑及指示劑一定要稱量,抑制劑要注意合理配伍。

6、培養(yǎng)基主要原料的質(zhì)量控制
配制培養(yǎng)基的主要原料有蛋白胨、牛肉浸膏、酵母浸膏、膽鹽、無(wú)機(jī)鹽和瓊脂等,這些主要原料的有劣,直接影響到培養(yǎng)基的質(zhì)量,由此也將影響檢驗(yàn)質(zhì)量。
指標(biāo)有感官、理化、物理、生物學(xué)。

五、檢測(cè)質(zhì)量保證

定期使用有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和次級(jí)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)(參考物質(zhì))進(jìn)行內(nèi)部質(zhì)量控制。實(shí)驗(yàn)室間的比對(duì)或能力驗(yàn)證,利用相同或不同方法進(jìn)行重復(fù)檢測(cè),對(duì)留存的樣品進(jìn)行在檢測(cè)。

六、微生物檢驗(yàn)質(zhì)控方法

1、菌落計(jì)數(shù)精密度控制直接計(jì)數(shù)
選擇同一標(biāo)本,要求檢驗(yàn)人員進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)。
將大腸菌(25922)或經(jīng)檢定標(biāo)化的菌片,通過(guò)合適的梯度稀釋,選擇合適的稀釋度進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)實(shí)驗(yàn)操作。36±1℃培養(yǎng)24h進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)。
菌落計(jì)數(shù)精密度控制重復(fù)計(jì)數(shù)法

2、重復(fù)計(jì)數(shù)要求
自身同一平皿重復(fù)計(jì)數(shù)誤差 小于7.7%
實(shí)驗(yàn)人員之間同一平皿重復(fù)計(jì)數(shù)誤差 ±18 .2%
自身同一梯度平行加樣兩皿間相對(duì)誤 小于7.7%
實(shí)驗(yàn)人員之間同一梯度計(jì)數(shù)誤差X±18 .2%范圍
不同梯度間菌落計(jì)數(shù)zui終誤差 小于7.7%

3、菌種鑒定質(zhì)控
菌種鑒定質(zhì)控要求,對(duì)所給的微生物菌種,按有關(guān)的方法及指標(biāo)進(jìn)行生化、血清等方面的鑒定。
鑒定質(zhì)量評(píng)價(jià):鑒定程序是否正確;鑒定方法是否正確;具體操作技術(shù)是否熟練,結(jié)果報(bào)告是否正確。每一項(xiàng)設(shè)立分值為25分。總分為100分。

4、內(nèi)部質(zhì)量控制的推薦頻率
菌落計(jì)數(shù)精密度控制: 1次/3月;
菌種鑒定控制: 1次/半年或1年
盲樣測(cè)定丟失的對(duì)照 1次/半年

六、實(shí)驗(yàn)室安全防護(hù)
1、培訓(xùn)與告之
實(shí)驗(yàn)室管理人員及實(shí)驗(yàn)人員必須了解相關(guān)工作有關(guān)的危險(xiǎn)。對(duì)招收新職工、工作開(kāi)始發(fā)生變化或使用新方法,啟用新的設(shè)備時(shí),這點(diǎn)尤為重要。所有工作人員,包括清潔和服務(wù)人員都要知道。需要進(jìn)行口頭和書面兩種方式的通知。有關(guān)儀器必須要有字跡清楚其安全使用的書面說(shuō)明。

2、標(biāo)志
在進(jìn)行致病性微生物工作的房間人口處必須要有警示標(biāo)志。
實(shí)驗(yàn)室的房間必須以使與微生物有關(guān)的危險(xiǎn)得以過(guò)免的方式裝置,以使微生物的傳播得到限制,房間還應(yīng)便于清潔和消除污染.工作臺(tái)必須由光滑的、耐消毒劑的材料制成。難以清潔的角落、彎頭及管道應(yīng)盡可能地避免污染。

3、防止空氣污染
加熱培養(yǎng)蒙或其它化學(xué)物質(zhì)時(shí),粉塵可擴(kuò)做到空氣中.這可給工作人員帶來(lái)過(guò)敏反應(yīng)或出現(xiàn)其它問(wèn)題.因此,設(shè)計(jì)排風(fēng)裝置很重要,以至包括天平附近的抽風(fēng)點(diǎn)。通常稱量應(yīng)按正確的安全規(guī)程進(jìn)行。

4、有毒有害物防護(hù)
濃酸和堿及其它腐蝕性化學(xué)物質(zhì)和毒性物質(zhì)必須專門保存,盡可能鎖存,以使它們引起的損害減至zui低.
對(duì)實(shí)驗(yàn)室所用的所有化學(xué)物質(zhì),實(shí)驗(yàn)室必須有記述其危險(xiǎn)及操作中可能的限制的產(chǎn)品表.
在所需的范圍內(nèi)工作人員必須使用人體防護(hù)裝置,防護(hù)服、手套籌.使用安全設(shè)施是實(shí)驗(yàn)人員的職責(zé)污染了的防護(hù)員應(yīng)盡快地更換,離開(kāi)工作室時(shí),必須脫去。

5、消除污染和廢物的處理
實(shí)驗(yàn)室必須要有關(guān)于應(yīng)如何消除濺出的微生物污染的書面說(shuō)明。另外,對(duì)廢物的處理,如用過(guò)的培養(yǎng)皿和打碎的玻璃器皿,應(yīng)有固定的程序。所有被洗的物品在洗刷前均經(jīng)高壓滅菌,洗滌工受微生物感染的危險(xiǎn)就可以盡可能避免。

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